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| 甘油三酯(Triglyceride，TG)又稱三酰甘油，是3分子長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，是人體內(nèi)含量多的脂類，大部分組織均可以利用甘油三酯分解產(chǎn)物供給能量，同時肝臟、脂肪等組織還可以進(jìn)行甘油三酯的合成，用酶學(xué)方法測定 TG 是生化檢測中的常用方法， 其特點是：1、靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度均高；2、使用溫和的反應(yīng)條件；3、操作簡便；4、適用于自動分析儀。 本公司甘油三脂(TG)檢測試劑盒(GPO-PAP 單試劑微板法)又稱磷酸甘油氧化酶法或磷酸甘油氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法等，其原理是甘油三脂被 LPL 水解為甘油和脂肪酸，后者經(jīng)甘油激酶和 ATP 磷酸化，G-3-P 被磷酸甘油氧化酶(GPO)氧化并產(chǎn)生過氧化氫，再經(jīng)過氧化物酶(POD)催化，使 4-氨基安替比林與酚(三者合稱 PAP)反應(yīng)，生成紅色benhun醌亞胺(Trinder 反應(yīng))，酶標(biāo)儀在 500~520nm 處進(jìn)行比色測定，用于人或動物的血清、血漿、腦脊液、細(xì)胞、組織等樣本中的甘油三脂含量定量測定。該試劑盒僅用于科研域，不適用于臨床診斷或其他用途。 |
| 名稱 | 規(guī)格 | 儲存 | |
| 試劑(A): GPO-PAP工作液 | Good's Buffer | 30mL | -20℃ 避光 |
| LPL、GK、GPO | |||
| 過氧化物酶(POD) | |||
| 4-氨基安替比林 | |||
| 對氯酚 | |||
| 試劑(B): Glycerol 標(biāo)準(zhǔn)(1.7mmol/L) | 1mL | 4℃ 避光 | |
| 試劑(C): ddH2O | 1mL | RT | |
| 1、生理鹽水或PBS。 |
| 2、96 孔板或離心管、小試管。 |
| 3、水浴鍋或恒溫箱。 |
| 4、酶標(biāo)儀或分光光度計。 |
| 5、全自動或半自動生化分析儀。 |
| 一、樣本處理 | |||
| 1、血清、血漿、腦脊液樣本：從待測樣本中分離出的血清或血漿不應(yīng)有溶血，直接檢測，如超過線性范圍，用生理鹽水稀釋后檢測。 | |||
| 2、細(xì)胞樣本 | |||
| a:取適量的細(xì)胞(一般推薦＞106以上)，1000g離心10min，棄上清，留取沉淀。 | |||
| b:.用 PBS 或生理鹽水清洗 1-2 次，1000g離心10min，棄上清，留取沉淀。 | |||
| c:加入200-300μl 的PBS或生理鹽水勻漿，冰浴條件下超聲破碎細(xì)胞，功率300W，每次3-5s，間隔30s,重復(fù)3-5次；亦可手動勻漿，制備好的勻漿液不可離心；亦可用1-2% Triton X-100 冰浴 30-60min，制備好的裂解液不可離心。 | |||
| 3、組織樣本：準(zhǔn)確稱取適量組織樣本，按質(zhì)量(g)：生理鹽水或PBS(mL)=1：9的比例，加入生理鹽水或PBS，冰浴條件下手動或機(jī)械勻漿，2500-3000g 離心10min，取上清待用。 | |||
| 二、酶標(biāo)儀TG測定操作: | |||
| 1：按下表依次加入試劑： | |||
| 加入物(μL) | 空白孔 | 標(biāo)準(zhǔn)孔 | 待測孔 |
| ddH2O | 3 | - | - |
| Glycerol 標(biāo)準(zhǔn)(1.7mmol/L) | - | 3 | - |
| 待測樣本 | - | - | 3 |
| GPO-PAP 工作液 | 300 | 300 | 300 |
| 2：充分混勻, 37℃水浴中孵育5min。 | |||
| 3：酶標(biāo)儀測定 500-520nm 吸光度，以空白孔調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)孔和各待測孔的吸光度。 | |||
| 三、分光光度計(1ml 比色杯)、半自動生化分析儀 TG 測定操作： | |||
| 1、按下表依次加入試劑： | |||
| 加入物(mL) | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 待測管 |
| ddH2O | 0.01 | - | - |
| Glycerol 標(biāo)準(zhǔn)(1.7mmol/L) | - | 0.01 | - |
| 待測樣本 | - | - | 0.01 |
| GPO-PAP 工作液 | 1 | 1 | 1 |
| 2、充分混勻, 37℃水浴中孵育5min。 | |||
| 3、分光光度計測定500-520nm吸光度，空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管和各待測管的吸光度。 | |||
| 四、普通分光光度計(2mL比色杯)TG 測定操作: | |||
| 1、按下表依次加入試劑： | |||
| 加入物(mL) | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 待測管 |
| ddH2O | 0.02 | - | - |
| Glycerol 標(biāo)準(zhǔn)(1.7mmol/L) | - | 0.02 | - |
| 待測樣本 | - | - | 0.02 |
| GPO-PAP 工作液 | 2 | 2 | 2 |
| 2、充分混勻, 37℃水浴中孵育5min。 | |||
| 3、分光光度計測定500-520nm吸光度，空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管和各待測管的吸光度。 | |||
| 五、全自動生化分析儀 TG 測定操作: | |||
| 1、按下表依次加入試劑： | |||
| 加入物((μL) | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 待測管 |
| ddH2O | 3 | - | - |
| Glycerol 標(biāo)準(zhǔn)(1.7mmol/L) | - | 3 | - |
| 待測樣本 | - | - | 3 |
| GPO-PAP 工作液 | 300 | 300 | 300 |
| 2、充分混勻, 37℃水浴中孵育5min。 | |||
| 3、全自動生化分析儀測定 500-520nm 波長處吸光度，以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管和各待測管的吸光度。 | |||
| 主波長/次波長 | 500/600nm |
| 反應(yīng)類型 | 終點法 |
| 反應(yīng)方向 | 升反應(yīng)(+) |
| 血清、血漿等液體樣本(空白調(diào)零)： |
| TG(mmol/L)=｛(待測管吸光度-空白吸光度)/(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度-空白吸光度)｝×1.7mmol/L |
| 血清、血漿等液體樣本(全自動生化分析儀)： |
| TGmmol/L)=(待測管吸光度/(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度)×1.7mmol/L |
| 細(xì)胞、組織等樣本(空白調(diào)零)： |
| TG(mmol/L)=｛ ( 待 測 管 吸 光 度 - 空 白 吸 光 度 )/( 標(biāo) 準(zhǔn) 管 吸 光 度 -空 白 吸 光 度 ) ｝×1.7mmol/L÷待測樣本濃度(mg/mL) |
| 細(xì)胞、組織等樣本(全自動生化分析儀)： |
| TG(mmol/L)=(待測管吸光度/(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度)×1.7mmol/L÷待測樣本濃度(mg/mL) |
| 健康成年人： |
| 理想范圍：＜1.7mmol/L(＜150mg/dl) |
| 邊緣升高：＜1.7-2.25mmol/L(150-199mg/dl) |
| 升高：＜2.26-5.64mmol/L(200-499mg/dl) |
| 很高：≥565mmol/L(≥500mg/dl) |
| 外觀 | 無色至淡黃色澄清液體 |
| 線性范圍 | 0.05-9.0mmol/L(4~790mg/dl)，R2>0.98 |
| 靈敏度 | 檢測下限 0.05mmol/L(4mg/dl) |
| 變異系數(shù) | 批內(nèi)<5%，批間<8%，總誤差<10% |
| 空白吸光值 | <0.2(1cm 光徑) |
| 干擾因素 | 膽紅素<205μmol/L；血紅蛋白<6g/L；EDTA、肝素抗凝時，對結(jié)果無明顯影響。 |
| 穩(wěn)定性 | 密閉，6個月 |
| 1、上述低溫試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降。 |
| 2、本法可直接用于檢測腦脊液中的TG含量，但不能直接檢測尿液中的TG含量，因為未經(jīng)處理的尿液中含有還原性物質(zhì)，影響過氧化物酶反應(yīng)。 |
| 3、待測樣本如不能及時測定，應(yīng)置于2-8℃保存，3天內(nèi)穩(wěn)定。 |
| 4、本法線性范圍可達(dá)9.0mmol/L，如果樣本TG濃度過高，結(jié)果可能呈假性降低，應(yīng)用生理鹽水稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。 |
| 有效期： | -20℃ 避光， 6個月有效。 |
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