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　　實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)板如何選擇!

　　細(xì)胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型);培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;根據(jù)材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細(xì)胞培養(yǎng)板。具體選擇時(shí)根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的類型、所需培養(yǎng)體積及不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ā?/p>

　　(一)平底和圓底(U型和V型)培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇：

　　貼壁細(xì)胞一般用平底培養(yǎng)板。懸浮型細(xì)胞的培養(yǎng)一般用V型。

　　U型培養(yǎng)板亦多用于培養(yǎng)懸浮型細(xì)胞 。V型培養(yǎng)板有時(shí)用做免疫學(xué)血凝集的實(shí)驗(yàn)。

　　細(xì)胞培養(yǎng)板主要是PS材料。材料是treated sufface。便于細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)與伸展。當(dāng)然還有浮游細(xì)胞的生長(zhǎng)材料，同時(shí)還有l(wèi)ow binding surface，有關(guān)更多實(shí)驗(yàn)材料上的應(yīng)用與對(duì)材料的選擇。

　　問：我想測(cè)吸光度用酶標(biāo)儀，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板行嗎?請(qǐng)問酶標(biāo)板 多孔細(xì)胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別?

　　答：用多空細(xì)胞培養(yǎng)板測(cè)吸光度肯定可以拉，我們經(jīng)常用它來做樣品的蛋白定量和MTT檢測(cè)。

　　區(qū)別：酶標(biāo)板一般要比細(xì)胞培養(yǎng)板貴，細(xì)胞板主要做細(xì)胞培養(yǎng)，但也可以用來測(cè)蛋白濃度;酶標(biāo)板包括包被板和反應(yīng)板，一般不能用做細(xì)胞培養(yǎng)，它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測(cè)，它需要更高的要求還需要特定的酶標(biāo)工作液。如下是個(gè)用酶標(biāo)板檢測(cè)冠狀病毒IgM/IgG抗體例子：見網(wǎng)站

　　常用不同培養(yǎng)板的孔底面積及推薦加液量：不同孔板所加培養(yǎng)液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范圍，結(jié)合不同孔的底面積就可算出各培養(yǎng)孔的適宜加液量。若加液量過多會(huì)影響氣體(氧氣)交換，而且在搬動(dòng)過程中易溢出造成污染。具體所加細(xì)胞密度依實(shí)驗(yàn)的目的不同靈活掌握。

　　培養(yǎng)器皿 面積(cm2)培養(yǎng)液量(ml) 細(xì)胞量

　　96 孔培養(yǎng)板 0.32 0.1 10e5

　　24孔培養(yǎng)板 2 1.0 5×10e5

　　12孔培養(yǎng)板 4.5 2.0 10e6

　　6孔培養(yǎng)板 9.6 2.5 2.5×10e6

　　3.5 cm 培養(yǎng)皿 8 3.0 2×10e6

　　6 cm 培養(yǎng)皿 21 5.0 5.2×10e6

　　10 cm 培養(yǎng)皿 55 10.0 13.7×10e6

　　25cm2 培養(yǎng)瓶 25 5.0 5×10e6

　　75cm2 培養(yǎng)瓶 75 15～30 2×10e7

　　(一)細(xì)胞培養(yǎng)板的密閉和污染問題：

　　細(xì)胞培養(yǎng)板的加樣和操作：細(xì)胞培養(yǎng)板在進(jìn)行細(xì)胞操作時(shí)同樣遵循嚴(yán)格無菌的原則，各項(xiàng)操作要保證規(guī)范、科學(xué)，不對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)造成額外的影響。這其中最常見的問題就是如何保證加樣后細(xì)胞的均勻和盡量減少換液對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的影響。

　　問：96，24孔培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿的蓋子都很松，這樣是方便了透氣，但是細(xì)菌、霉菌等污染物會(huì)不會(huì)也隨著溜進(jìn)去呢?

　　答：1.蓋子很松，屬于半開放培養(yǎng)，這樣的目的是透氣(實(shí)際上是為了使培養(yǎng)皿外的co2能夠與培養(yǎng)皿充分交換，維持培養(yǎng)基的pH值)。

　　2.凡事有利必有弊，這樣當(dāng)然增加了污染的可能性。此外這樣還會(huì)使培養(yǎng)皿內(nèi)的液體蒸發(fā)，這對(duì)于精確定量的藥物來說就顯得值得注意了。所以以下二條措施是必須的a培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須清潔(定期紫外線照，酒精擦洗，盡量少開關(guān)培養(yǎng)箱)b培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度必須始終保持為*(培養(yǎng)箱內(nèi)放置無菌蒸餾水的水槽)。

　　(二)細(xì)胞分布不均及解決辦法：

　　問：我的細(xì)胞接種培養(yǎng)板，細(xì)胞總是聚集在周邊部分，該如何處理啊?我看園子里有的戰(zhàn)友的細(xì)胞卻是聚集在中間，是不是板子的質(zhì)量問題啊?

　　答：請(qǐng)問你的細(xì)胞是如何混勻的?是滴管吹打還是振蕩培養(yǎng)板?如果是后者，而且是轉(zhuǎn)圈搖勻的話，很有可能由于離心力的作用使細(xì)胞甩到周邊部分，導(dǎo)致細(xì)胞中間少，四周多!自己可是試試!

　　周邊一般是相對(duì)會(huì)多一點(diǎn)，但是中間的數(shù)量也不會(huì)很少啊~~ 鋪板的時(shí)候我也沒有特異去振蕩培養(yǎng)板。

　　(三)6孔板接種和換液：

　　問：我的細(xì)胞傳代很正常，但一種到六孔板里(不管加藥和對(duì)照)，總有兩三個(gè)孔(隨機(jī))細(xì)胞長(zhǎng)得不好，很小，像破碎了。有人遇到過這種情況嗎?到底是啥原因呢?請(qǐng)各位指點(diǎn)

　　答：可能跟你加液的溫度有關(guān)。如果你細(xì)胞剛剛拿出來?yè)Q液加液，培養(yǎng)基也是從4度冰箱拿出來不久，很容易細(xì)胞就會(huì)凍死了。建議你最好把培養(yǎng)基先在培養(yǎng)箱里邊孵育15min先。

　　(四)24孔板接種：

　　問：我把細(xì)胞消化接種到24孔板之后，已經(jīng)四天了，老是每孔的中間部分長(zhǎng)不滿，每天換液時(shí)都用PBS 清洗，第二天換液時(shí)都出現(xiàn)同樣的情況，每孔的邊緣長(zhǎng)的很好，中央大量死細(xì)胞，是什么原因!

　　答：是中央長(zhǎng)不滿，還是中央有和邊緣相同密度的細(xì)胞，但是大部分都是死細(xì)胞?如果是前者，也許不是技術(shù)問題，而是物理問題了。

　　我是選擇孔內(nèi)鋪蓋玻片，在玻片上種植。每次換液都用PBS洗，必要的步驟嗎?另外，也有可能和細(xì)胞種類有關(guān)或者和培養(yǎng)液有關(guān)?

　　我想你的培養(yǎng)液可能加的太少了。由于表面張力的作用，培養(yǎng)板的邊緣液體會(huì)向上走，造成培養(yǎng)液面呈現(xiàn)一個(gè)凹面(就像量筒的液體凹面一樣)，中央的細(xì)胞正好在凹面的處，培養(yǎng)液少，細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)不夠，甚至干涸掉，空氣中的氧氣也會(huì)造成損傷，即使有增值過來的細(xì)胞也會(huì)死掉。

　　經(jīng)驗(yàn)：

　　1.所有待接種的細(xì)胞懸液在種板前一定要用吸管混勻。

　　2.按資料記載，24孔板的液體量為1ml，個(gè)人也覺得1ml的量足矣。

　　3.接種時(shí)，要慢慢加樣，且記得輕微旋轉(zhuǎn)槍頭，這樣做對(duì)細(xì)胞均勻分布有一定效果。

　　4.接種后最好直接放入培養(yǎng)箱讓細(xì)胞適應(yīng)培養(yǎng)板這個(gè)新的環(huán)境，個(gè)人認(rèn)為沒有必要在室溫放置一段時(shí)間。

　　5.根據(jù)細(xì)胞的特性，細(xì)胞均喜歡聚集在邊緣生長(zhǎng)，所以我考慮到，你的問題還有可能是接種時(shí)的細(xì)胞密度不夠，導(dǎo)致周邊密集，中間稀疏的錯(cuò)覺。你的拌種密度是多少?

　　另"要慢慢加樣，且記得輕微旋轉(zhuǎn)槍頭"的意思就是:加樣不能太快，避免細(xì)胞在一個(gè)加樣處聚集，且注意在不同的部位進(jìn)行加樣，即邊加邊活動(dòng)槍頭，人為使細(xì)胞趨于均勻分布，我個(gè)人覺得有一定的效果，不知這次我解釋清楚沒有。

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