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你知道NC膜和PVDF膜該怎么選么?
更新時間:2023-03-08瀏覽:1670次

  你知道NC膜和PVDF膜該怎么選么?

 

  1、硝酸纖維素膜

  硝酸纖維素膜(NC膜)是蛋白印跡實驗的標準固相支持物。在低離子轉移緩沖液的環(huán)境下,大多數(shù)帶負電荷的蛋白質會與硝酸纖維素膜發(fā)生疏水作用而高親和力的結合在一起,雖然這其中的機制還不是十分清楚,但由于硝酸纖維素膜(NC膜)的這個特性,而且易于封閉非特異性結合,從而得到了廣泛的應用。

  在非離子型的去污劑作用下,結合的蛋白還可以被洗脫下來。根據(jù)被轉移的蛋白分子量大小,要選擇不同孔徑的硝酸纖維素膜(NC膜)。

  因為隨著膜孔徑的不斷減小,膜對低分子量蛋白的結合就越牢固。但是膜孔徑如果小于0.1mm,蛋白的轉移就很難進行了。

  從膜的質地上來看,最重要的指標就是單位面積上能夠結合的蛋白的量。硝酸纖維素膜(NC膜)的結合能力主要與膜的硝酸纖維素的純度有關,市場上有些硝酸纖維素膜(NC膜)通常會還有大量的醋酸纖維素,因而降低了蛋白的結合量。如果采用的是*純度的硝酸纖維素, 保證了最大的蛋白結合量,可達80-150μg/cm2。

  由于*的純度,因而也大大減少了非特異性的結合,降低雜交背景,無需高嚴謹度的洗脫步驟。其次,膜的強度和韌性也是需要考慮的因素。常規(guī)的硝酸纖維素膜比較脆,漂洗一兩次就會破損,不能反復使用。

  2、PVDF轉移膜

  PVDF膜即聚偏二氟乙xi膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白質印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF本質是一種疏水性的聚合物,在水溶液中不會浸濕,為了在水性緩沖液和系統(tǒng)中使用PVDF膜,首先必須將其浸泡在50%(v/v)或更高濃度的醇溶液中。

  (PVDF膜在使用時需預處理,用甲醇處理的目的是活化膜上的正電基團,使其更容易與帶負電的蛋白結合。)甲醇、乙醇和異丙醇都適合浸泡這種膜。隨著膜的外觀從不透明到半透明,*浸濕是顯而易見的。之后必須用水反復沖洗以去除醇類,經(jīng)預處理的膜可以直接放入轉印緩沖液中平衡。

  一旦膜被浸濕,蛋白結合可通過蛋白與膜的接觸而實現(xiàn)。由于蛋白與膜的結合貫穿整個膜的厚度(深度),結合能力是由孔的內(nèi)部表面積來決定的,隨著膜孔徑的不斷減小,膜對低分子量的蛋白結合就越牢固。

  0.2um PVDF膜內(nèi)部表面積大約是0.45um PVDF 膜的三倍,使其吸附能力更高。PVDF膜是疏水性的,一般大于20kD的蛋白就可以用0.45μm的膜,小于20kD的蛋白就要用0.2μm的膜。

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