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影響ELISA試劑盒測定成果的原因和解決辦法,有哪些?
ELISA是什么?
ELISA是酶聯(lián)免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 的簡稱。它是在免疫酶技術的基礎上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術 。
酶聯(lián)免疫吸附試驗的標準程序,通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(capture Ab)固定在固相載體上,再加入一級檢測抗體(primarydetection Ab),形成一個抗原抗體的復合物。如果該抗體已經(jīng)用酶(enzyme)標記了,即可用來直接測定抗原的量,若無,則可利用另一個酶標記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質(zhì)(substrate),作用后產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關系,依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度。
ELISA試劑盒方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定,具有靈敏度高,操作簡略等優(yōu)點,但是在詳細實驗過程中影響要素較多,而且要按照嚴厲的闡明要求,在臨床檢驗中除正常反響外,有時??梢姷揭恍╁e誤成果(即假陽性或假陰性成果)。
影響ELISA測定錯誤成果的原因主要有:
?、贅吮疽?
②試劑要素;
?、鄄僮饕?。
一、類風濕因子
人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)能夠與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶符號二抗的FC段直接結合,然后導致假陽性。
解決辦法:
1.用F(ab)2替代完好的IgG;
2.標本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有用);
3.檢測抗原時,能夠用2-巰基yi醇等加入到標本稀釋液中,使RF降解。
二、補體
ELISA系統(tǒng)中固相一抗和符號二抗過程中,抗體分子發(fā)作變構,其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來,使C1q 能夠將二者連接起來,然后形成假陽性。
解決辦法:
1.用EDTA稀釋標本;
2.用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。
三、嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig(s) 結合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,也能形成假陽性。
解決辦法:
可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig(s),但加入量不足或亞類不同時無效。
四、嗜靶抗原的本身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體,有時能與靶抗原結合形成復合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定成果。
解決辦法:
測定前需用理化方法將其解離后再測定。
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